IGRA検査の注意事項

T-スポット.TB検査の注意事項

採血時の注意事項

1. 採血管温度：21.5±3.5℃, 採血時の環境温度：21.5±3.5℃
2. 採血管：エンドトキシンフリーのものを推奨
3. 抗凝固剤： Vacutainerクエン酸ナトリウムCPT、ヘパリンナトリウムCPT、ヘパリン（ナトリウム、リチウム）等を使用して血液凝固を阻止する。
   ただし、採血から検体処理までの時間が8時間を超える場合は、抗凝固剤はヘパリンのみを使用。クエン酸ナトリウムはカルシウムイオンと結合して坑凝固作用を示す。このため血球容積が変化するので、細胞性免疫機能検査には適さない。
   T-Cell Xtend試薬を使用することで、採血後32時間まで検査可能。ただし本試薬はTリンパ球の活性を採血直後の状態で維持するものではなく、採血後長時間保存中に生じるIFN-γ産生阻害物質を、物理化学的に除去するためのものである。
   従って、T-Cell Xtend試薬を効果的に使用するためには、検体血液中の的となるPBMCの生存活性を落とさないことが重要で、高い検査精度を保持するためには採血直後から検査を開始するまで21.5±3.5℃を維持しなくてはならない。
4. 採血に使用できない抗凝固剤：EDTA（禁忌）
5. 採血量：2歳までの小児は2mL
   2～9歳以下の小児は4mL
   10歳以上の小児および成人は6～8 mL。

検体搬送時の注意事項

1. 搬送温度：21.5±3.5℃
2. 搬送用機材：T-スポット検査専用の温度管理搬送用ボックスを使用
3. 夏季、冬季の温度管理は特に厳しく行い、（常温＝季節の温度）という誤った考え方で採血後の血液を保存・搬送しない。
4. 搬送時間：採血後32時間までは検査可能とされているが、「生体内の細胞性免疫反応を体外で再現させる検査：ex vivoの検査」で有るため、人に依って検査可能な時間は異なる。この点に考慮して検査を開始することが望ましい。

PBMC調製時の注意事項

1. ※禁忌事項 ： Ficoll-Paque PLUSに血液を重層して遠心した後、Ficoll-Paque PLUSもPBMC層（バフィーコート）も血漿層も一緒にデキャントで洗浄用コニカルチューブに移し、二回目の遠心（洗浄操作）を行ってはいけない。
2. PBMCの調製はバフィーコートのみを採取しなくてはいけない。
3. 調製に使用する洗浄液、培養基類：37℃
4. Ficoll-Paque PLUS液温度 ：21.5±3.5℃
   本液は細胞分離用比重液である。このため、本液の使用温度が規定温度範囲を逸脱した場合は、目的とする細胞集団以外の細胞の混入を許す可能性が高くなる。
5. 正確に250万PBMC／mLを調製：この調製が不正確な場合（範囲幅で調製した場合）、検査に使用する細胞の数は不適切な数となる。このため得られる陽性スポット数には不正確なスポットが混在(或いはあるべきスポットが欠落)し、結果として精度の低い検査結果と成る。
   正しい結果を得るためには、個々の血液から回収した個々のPBMC数に対する厳密な調製を行い、T-スポット検査ストリップ1ウエル当たり正確に25万個のPBMCを添加することが不可欠である。

培養時の注意事項

1. 培養器の条件：37℃、5％CO₂、加湿
2. プレートを一旦培養器にセットした後は、培養時間中静置したまま動かさない。
3. 培養時間：16～20時間培養する。